FDA指南解读!CAR-T 细胞产品开发在CMC阶段的五大注意事项

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                FDA指南解读!CAR-T 细胞产品开发在CMC阶段的五大注意事项

                2024年02月22日
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                2024年1月31日,FDA正式发布 “Considerations for the Development of Chimeric Antigen Receptor (CAR) T Cell Products”,为CAR-T细胞产品的开发提供了化学、制造和控制(CMC)、药理学和毒理学以及肿瘤适应症(包括血液系统恶性肿瘤和实体瘤)临床研究设计的相关建议。

                 

                CAR-T 细胞制造涉及多种生物物料和复杂的多步骤程序,这些因素都是产品批间差异的潜在来源。因此,生产过程的控制以及※适当的中间和批次放行检测对于确保 CAR-T 细胞的安全性、质量和批间一致性至关重要。本期我们聚焦FDA最新版指南,深度解读CAR-T 细胞产品CMC阶段的五大注意事项!

                 

                ▲ 图源 | FDA官网

                 

                CMC重点是产品安全和生产控制,产品生命全过程各关键节点的检测项和验收标准,以及如何应对开发阶段的生产变更做出了详细⊙说明。2017年12月NMPA颁布的《细胞治疗产品研究与评价技术指导原则(试行)》、2018年6月NIFDC颁发的《CAR-T细胞治疗产品质量控制检测研究及非临床研究考虑要点》确定如何对CAR-T细胞治疗产品在不同研发阶段进行质量控制,保障产品①全生命周期安全、有效和质量可靠。

                 

                 

                一、载体生产和检测

                 

                2020年1月 “Chemistry, Manufacturing, and Control (CMC) Information for Human Gene Therapy Investigational New Drug Applications (INDs)”,即GT CMC指南,为载体的生产和检测提供了建议。申请IND,必须根据cGMP标准生产载体,并且分析方法需验证;申请BLA审查期间,载体生产设施将接受检查。FDA建议描述载体结构、主细胞库和工作细胞库的表征和测试、参考物质的表征、载体生产和♀检测以及载体稳定性。载体批次放行检测应包括安全性、鉴定、纯度和效价的测量。此外,FDA建议载体批次放行测试包括检测载体浓度,优化T细胞转导以确定每个细胞需要加入的载体量,以达到CAR-T细胞制剂中CAR阳性细胞的目标百分比。

                 

                ▲ GT CMC指南,图源 | FDA官网

                 

                 

                二、细胞起始材料的收集※、处理和测试

                 

                由于供体差异,可能是批次间变异性↘的主要来源。FDA建议从收集到生产前阶段,处理起始材料所用的工艺如2020年1月指南“GT CMC指南V.A.2.c.ii”部分所述,在所有白细胞分离收集地点都实施这些程序,应包括运输过程和冷冻保存步骤的验证,包括在预期条件下对白细胞分离起始材料稳定性的评估。建立白细胞分离起始材料的验收〗标准,可以指定最少细胞数、活力和CD3+细胞百分比等。

                 

                 

                三、CAR-T细胞生产和检测

                 

                2020年1月指南“GT CMC指南”中说明了生产体外修饰细胞的建议:早期产品表征(IV.A)、杂质特性(V.A.3.b.i和ii)、生产工艺开发(V.A.2.f和V.B.2.c)和设施¤考虑(V.C.1)。本指南为CAR-T细胞生产和检测提供了具体建议和额外细节。

                 

                CAR-T细胞生产工艺控制

                 

                为了促进CAR-T细胞批次间的一致性,FDA建议对生产工艺进行良好控制,可以通过使用优质材料、CPP的过程中控制、过程中测试以及CQA中间体和最☆终产品的测试来实现。FDA建议人类或动物源性成分进行适当的外源性■检测。

                 

                在当前良好生产规范(CGMP)条件下,应使用经验证的无菌工艺进行生产。IND应证明通过开发或工艺批次生产,按照拟定的制造工艺生产CAR-T细胞的能力,进一步支持产品安全性。一般来说,来自健康ω捐赠者的起始材料适用于生产工艺开发批次;当使用患者来源的♂起始材料时,可能建议对自体CAR-T细胞进行额外的生产工艺开发。CAR T细胞的过程中测试方案通常评估多个参数(例如,活力、细胞数量、细胞表型、CAR表达)。FDA建议对CAR T细胞进行稳定性研究,以支持2020年1月指南“GT CMC指南V.A.7和V.B.8”中所述的保持和储存时间。另外,生产设备的运行参数应验证以支持BLA。

                 

                CAR-T细胞分析检测

                 

                对CAR-T细胞□ 的分析检测,目的在于确保产品的安全性、特性、质量、纯度和强度(包括效力)。在2020年1月指南“GT CMC指南V.A.4和V.B.5”提供了Drug Substance (DS)和Drug Product (DP)分析测试的一般建议。V.A.4.b.i包括药典测试替代方法的建议。V.A.5.b.i包括对新鲜制备细胞产品的建议,或在最终配方和患者给药之间有限保持时间内使用的细胞产品→的建议。

                 

                01 流式细胞术

                流式细胞术可以在整个生产过程中评估CAR-T细胞多种属性(例如,细胞活力、特性、纯度、强度)。在开发过程中使用的流式细胞术,应提供方法的可靠和可重复的结果。

                 

                FDA建议提交初始IND时,包括:1)分析说明,包括抗体组合和用于确定检测到的每个细胞群的】门控策略。建议∑收集最终产品中相关细胞群信息,包括预期不会产生】治疗效果的细胞(如残留肿瘤细胞,如适用)。2)仪器校准和验证,以确保结果的准确性。3)分析控制清单,可能包括:用于计算补偿值的单染色补偿控制;荧光负一(FMO)控制,以确定小种群的荧光扩散和选通边界;和同型对照以『确定非特异性结合。

                 

                作为分析开发的一部分,建立并实施书面程序,以确保正确的样本染色、采集和数据分析。建议进行抗体滴定以确定最佳抗体稀释度。

                 

                FDA建议直接检测CAR,以确定CAR阳∑ 性细胞的百分比。如果通过替代蛋白表达(如检测共◣表达基因)或其█他广泛特异性试剂(如蛋白L)检测到CAR,则应证明与CAR表达的相关性。

                 

                必须进行批次放行流式细胞术的综合验证研究,以支持上△市。该验证ξ研究应按照ICH Q2进行,并□验证用于CAR-T细胞放行的流式细胞组合中每个荧光标记物。稳健性研究应包〓括确定染色前以及染色和采集之间样品的最大保持时间。

                 

                02 载体拷贝数(VCN)

                 

                转基因整合可能改变细胞基因的表达,并导致致瘤性。因此,DP中的转基因整合ㄨ是衡量CAR-T细胞放行的重要安全参数。如果载体ξ 系统指导转基因整合,则应确定每∮个CAR阳性细胞的平均整合数,通常称为VCN,并在每个批次的分析证书(COA)上报告。用CAR阳性细胞百分比,可以计算每个CAR表达细◣胞的平均VCN。FDA建议通过经验确定VCN放行标准,并根据风险◣评估进行论证。风险评估可能包括来自研究的支持性数据,如插入位点分析、克隆优势、剂量、适应症、研究人群等。例如在未经扩增培养的情况下生产的CAR T细胞,在∴批次放行测试时确定稳定整合的VCN可能很困难(例如,由于非整合ぷ载体的游离拷贝持续存在)。

                 

                03 鉴定

                 

                必须对用于上市申请的最终产品进行鉴定。鉴定应充分识别产品,并将其与同一╳设施中的其他产品区分开来。FDA建议对CAR-T细胞的鉴定试验包括测量转基因存在的试验(例如,通过流式细胞检测CAR表达,通过PCR检测基因)和针对最终产物的细胞成分(例如,细胞表面标记物)的特异性试验,如 “GT CMC指南”V.B.5.b.ii所述,HLA分型可》用于自体CAR T细胞;然而,HLA分型并不能检测基因修饰√。

                 

                04 效力

                 

                载体和CAR-T细胞DP都必须测试效力。可以建议使用矩阵筛选法来测试效力(例如,细胞杀伤试验、转导效率测定和细胞因子分泌试验)。FDA建议在产品开发过程中使用正交方法来表征CAR-T细胞功能。这种方法将支持可比性研究,并可确定用于商业批次⌒ 放行的最佳分析矩阵。

                 

                 CAR-T细胞的标签

                 

                IND产品必须贴上标签,并注明“警告:新药——受美国法律限制用于研究用途▓”。FDA建议标签包括产品名称、制造商信息以及“请勿过滤”和“请勿辐照”警告。用自体起始材料制造的CAR-T细胞必须贴上“仅供自体使用”的标签。根据对自体起始材料进行的供体ζ检测和筛查,自体CAR-T细胞的标签必▽须注明“未评估感染性物质”,除非已根据21 CFR 1271.75、21 CFR 1271.80和21 CFR 1271.85(21 CFR 1271.90(c)(2))进行了所有其他适用的筛查和检测。如果进行的筛查或测试结果表明存在相关〗传染病病原体和/或相关风险因素或临床证据,则CAR T细胞〗也必须贴上21 CFR 1271.3(h)中所示的生物危害图例。如果CAR-T细胞表达多个转基因元件,则效价测定应测量每㊣个功能元件的活性。

                 

                 

                四、CAR-T细胞产品生命周期内生产变更管理和可比性评估

                 

                CAR-T细胞产品生命周期中的变化,包括最终容器、培养过程中使用的细胞因子或细胞扩增持续时间的变化,都可能△会影响产品质量、安全性、功效或稳定性,FDA建议申请人在考虑此类变更时与OTAT沟通。

                 

                在规划此类变更时,一般建议申请人考虑以下事项

                1)载体生产过程的重大变◎化(例如,从贴壁培养到悬浮培▂养)应得到可比性研究的支持,评估此类变更对载体和CAR-T细胞的影响,应包括对⊙变化前后载体的并行分析。

                2)对于培养基中生长因子或添加物浓度或类型的变化,应进行更稳健的可比性研究。

                3)当CAR-T细胞或载体生产设施发生变化时,应建立生产设施之间的可比性。

                 

                变更管理

                 

                关键实施及产品开发阶段变更,应进行风险评∩估,该风险评估应告知是否需要进行分析性可比性研究。FDA建议在启动可比性研究或实施变更之前,将拟议变更的细节、伴随的风险评估和拟议变更管理策略作为修◥订提交到IND,建议申请人与OTAT讨论研究设计和验收标准。可根据ICH Q5E中描述的一般原则,评估CAR-T细胞变化前后的☆分析可比性。

                 

                如果没有足够的证据证明分析的可比性,则可能需要进行新的非临床或临床研究,这可能会推迟产品批准。如果开发后期变更,且没有支持BLA的额外临床◣研究计划,则分析可比性研究应与批准产品进行的研究一样全面和彻底。

                 

                可比性研究设计

                 

                FDA建议,拟议的分析方法适用于检测变更对产品安全性和有效性的潜在影响。用拟议变更生产的产品能满足当前放行≡标准的证明通常不足以建立可比性。应使用适当的统计方法和预定义的验收标准进行分析。进行批↘次放行测试的属性外,还应使用可靠的分析方法监测各种产品属性,包括细胞表面标记。

                 

                由于自体CAR-T细胞的细胞起始材料固有的变异性,使用历史批次来评估可比性可能不够。FDA建议尽可能使用相同的细胞起始材料,通过并行测试来评估CAR-T细√胞的可比性。如使用来自健康供体的CAR T细胞进行可比性研究,当健康供体生产的产品不足以评估自体CAR-T细胞的产品可比性,可比性研究还应包括对由患者细胞起始材料生产的CAR T细胞的评●估。

                 

                 

                五、单中心或多中心生产

                 

                单点生产

                 

                收集细胞起始材料,并将其运送集中生产点★生产CAR T细胞。CAR-T细胞随后被运送到本地或远程临床地点进¤行给药。单点生产可能降低因设施之间差异而产生的产品可变性。

                 

                多中心生产

                 

                多中心生产可以缩短从细胞起始材料收集到自体ξ产品给药时间;然而,制造设施之间差异可能会导致产品可变性,申请人应该证明在每个中心生产的产品有可比性,以支持临床试验结果分析。FDA建议在可能的情况下,在整个生产设施中使用相同的标准操作程序(SOP)、培训、试剂♀和设备,还建议IND描述各生产场所制造过程中的任何差异。FDA建议提交数据,最好是来自使用ζ 相同细胞起始材料在每个中心进行鉴定,以证明每个中心生产的产品的分析可比性,包括用于测试的方法列表和用于确定分析可比性的预定义验收标准。

                 

                多中心测试

                 

                FDA建议使用分析转移方案以确保在每个测『试点进行的非药典试验适用于预期目的,并且在所有测试间可重复, 例如,流式细胞术。FDA建议在可能的情况下,在测试点中使用相同的SOP、试剂和设备。

                 

                 

                微谱生物科技

                 

                当前,CAR-T疗法已经成为众多药企进行管线↘布局突破创新的战略要点。伴随这一疗法的快速迭代与技术升级,CAR-T细▓胞产品的质量控制问题也越来越受到行业的广泛关注。

                 

                微谱生物科技一直致力于为生物药客户提供专业的生物安全质量研究GMP验证服务。我们已取得BSL-2实验室认证,并先后荣获ISO9001、CMA、CNAS等资质认可与「认证。以中外申报为标准,我们持续建◣立高质量服务体系,为客户打磨定制化的研究方案。

                 

                针对CAR-T细胞产品在CMC阶段的开发,微谱生物科技可以提供的服务有:

                 

                我们←的服务

                CAR-T细胞多种属性检测,如细胞活力、特性、纯度、强度的流式▅细胞术

                CAR-T细胞放行要求的,目的基因拷贝数,目的基因整合位点,转录水平一致性等

                CAR-T细胞的鉴定试验,包括测定转基因的试验,如流式╲细胞检测CAR表达,流式细胞检测最终产物的细胞表面标记物,测序检测基因等特异性试验

                CAR-T细胞的效力检测,如细胞杀伤试验、转导效率测定和细胞因子分泌试验等

                主细胞库和工作细胞库的表征和测试

                载体批次放行检测应包括生物安♂全性测试

                 

                 

                 

                 

                关于我们

                 

                微谱于2014年正式涉足生物制品服务领域,2019年成立微谱生物科技有限公司,成为集团→在生物药领域的重要战略布局。2022年公司荣获“江苏省民营科技企业”称号。

                 

                微谱生物科技立足于生物医药全产业链,依托创新型自主知识产权体系构建出成熟的生物制品质量研究平台生物安全服务平台GMP验证及法规咨询服务平』台药包材研究服务平台以及药械知识产权服务平台,致力于为国内外生物药企业提供合规、专业、一体化的生物制品质量与安全研究综合解决方案。